原代干细胞培养步骤,原代细胞培养的用途

胚胎干细胞培养是如何培养的?它的具体操作过程?饲养层细胞是成纤维细胞...

细胞在培养皿或瓶中生长，每天更换培养液，直至汇合后传代，以1：10的比例扩增。 适时进行细胞冻存，以保持细胞的连续性和稳定性。 特殊处理： 为使MEF细胞作为饲养层更稳定，需进行丝裂霉素处理或γ-射线照射。先复苏冻存细胞，将其接种在预处理的明胶培养皿中。

饲养层细胞： 在细胞培养中起分化抑制作用的单层贴壁细胞 。所谓饲养层细胞就是指一些特定细胞（如颗粒细胞、成纤维细胞、输卵管上皮细胞等已在体外培养的细胞），经有丝分裂阻断剂（常用丝裂霉素）处理后所得的细胞单层。

小鼠胚胎成纤维细胞(MEF) 作为原代培养细胞，其刺激增殖的能力强且可靠、易培养、来源丰富，常被用作干细胞培养的饲养层。一方面提供刺激干细胞增殖的各种因子，另一方面保持干细胞的未分化状态。虽然MEF传代次数有限，但可早期冻存一些，不断复苏，保持长期使用。MEF 的缺点是无法耐受G418 的筛选。

ES细胞培养时加饲养层不会促进细胞分化，通常使用的饲养层细胞为成纤维细胞，能够分泌一些促进干细胞维持的因子。传代培养是指将培养皿中生长的细胞用酶消化后，重新吹开后接种至新的培养皿中培养。

饲养层是一层细胞，用于提供干细胞培养所需的物质（教材中说的很清楚）。细胞培养液的成分有：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、血清或血浆.干细胞相关的培养液都必须在5％CO2的气体环境中培养使用。否则会对细胞产生影响。

饲养层细胞就是指一些特定细胞（如颗粒细胞、成纤维细胞、输卵管上皮细胞等已在体外培养的细胞），经有丝分裂阻断剂（常用丝裂霉素）处理后所得的细胞单层。一般铺在明胶层上（也可不铺）。饲养层细胞大部分可用MEF（小鼠胚胎成纤维细胞）。

细胞培养基础知识-干细胞培养基和培养基添加剂

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总之，首选MEM做粘附细胞培养；RPMI-1640做悬浮细胞和人白血病细胞单层培养是一个好的开始，它也广泛应用于哺乳动物细胞和杂交瘤细胞的培养，如人骨髓瘤细胞、鼠杂交瘤细胞、人白细胞以及B细胞和T细胞；各种目的无血清培养最好首选AIM V(12005)培养基(SFM)。

细胞培养基中添加的是肝素还是肝素钠 肝素是一种较重要的抗凝物质，可以抑制凝血酶原转变为凝血酶，从而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白。干细胞培养中肝素可以防止干细胞凝集，起保护作用。

有些细胞需要在培养基中配制时添加其他成分，L －谷氨酰胺是最常见的补充剂，会很快被用尽。这些添加物可以现配后过滤除菌再加入培养基内，也可溶解后使用那些分装好的储存溶液。

维持细胞生长的生物活性物质，在细胞代谢中起调节及控制作用。在细胞培养中，尽管血清是维生素重要来源，但是许多培养基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长。脂溶性维生素如：A、D、E、K。水溶性维生素如：BBBB1泛酸、叶酸、生物素、C、烟酰胺等。

作业:简述细胞原代培养的过程。

将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。

直接将过滤后的细胞液，进行率为的处理之后，然后直接分装到培养瓶中，放入培养瓶中进行培养即可。

消化后的细胞悬液经过离心和重悬后，接种到培养皿中进行培养。在培养过程中，需要定期观察细胞的生长情况，并进行必要的操作以维持细胞的活性。总之，细胞原代培养需要严格控制实验条件，包括样本选择、消化处理、培养基选择和培养条件等。同时，需要根据细胞的特性和实验需求进行灵活调整，以获得最佳的实验结果。

原代培养的基本过程包括取材、培养材料的制备、接种及培养等步骤。原代培养的方法很多，基本和最常用的是组织块培养法和分离细胞法。 组织块培养法 (1)基本操作过程 1）、用培养液湿润所取组织材料，并用锋利的眼科剪将附在其上的脂肪和结缔组织去除干净。

原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官，让它们在体外维持与生长。

当细胞从动植物中生长迁移出来，形成生长晕并增大以后，科学家接着进行传代培养，即将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质。

脐带血间充质干细胞原代培养,培养基很快就变黄了,怎么办

从培养箱取放细胞前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。培养瓶放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。操作的时候防护服、口罩、手套缺一不可。

ph值变化。污染细菌或者长时间不换液时，培养基变成黄色，主要是因为细菌和细胞过度增长，产生了酸性物质，拿出来之后，受环境温度影响，pH值发生变化，颜色主要来自酚红，酚红指示颜色非常灵敏，pH值范围为6值8，颜色由黄变为红。

可能是硝酸银浓度太高，和NAA在细菌裂解物的催化下和 NAA反应生成了硝基NAA 。因为我没做过这个实验，我只是说可能。NAA中有个萘基，它连了一个致活基团—CH2COOH，因此容易被空气中的氧气氧化成萘醌（黄色）。

改善内分泌 脐带间充干细胞通过修复内分泌系统，调节激素和代谢水平，改善女性内分泌失调会引起皮肤恶化，脾气暴躁，妇科疾病、肥胖等症状。调节免疫力 脐带间充质干细胞具有免疫调节作用，可以抑制异常的免疫反应，恢复免疫系统的平衡状态，从而改善自身的免疫功能，极大提高对抗疾病的抵抗力。

清洗骨头，剪开骨骺后，将细胞悬液离心，去上清，确保细胞纯度。采用无菌巴氏滴管进行换液，避免冲击细胞。第一次换液后，将部分培养液接种至新培养皿，观察8小时后再进行同步换液。问题与应对策略在BMSCs培养过程中，关键问题包括动物选择、培养基配置、操作技巧、换液时间以及传代和冻存等。

消化细胞的胰酶中的酚红的作用其实主要是起到PH指示剂的作用，还可以模拟一些激素的作用。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。