骨髓干细胞制作流程,骨髓干细胞怎么采集

手把手教学——大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)原代培养经验总结

BMSCs骨髓干细胞制作流程的魅力与功能BMSCs骨髓干细胞制作流程，作为干细胞大家族骨髓干细胞制作流程的一员骨髓干细胞制作流程，因其强大的分化能力和自我更新能力，被广泛用于组织修复和再生领域。它们在软骨损伤修复、神经再生等治疗中展现出巨大潜力，是干细胞疗法中不可或缺的细胞资源。

骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells， BMSCs)是骨髓内除造血干细胞之外的另一类非常重要的成体间充质干细胞，是骨髓造血微环境的重要组成部分，具有支持和调控造血的作用，能被诱导分化为成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞等多种细胞类型。

严谨的全骨髓提取首先，通过颈椎脱臼法进行全骨髓提取，对股骨和胫骨进行消毒，然后冲洗并分离骨髓。随后，通过离心和稀释，得到富含细胞的悬液，这是后续分离的第一步。 培养与观察细胞被计数后，置于恒温培养箱中，10% CO2环境中培养，密切关注细胞状态，适时更换培养基以维持最佳生长环境。

所以干细胞治疗为卵巢功能早衰患者带来了希望，国内目前就有医学博士李非研发的凤血干细胞卵巢移植，将高数量和质量的干细胞直接移植到患者卵巢，利用干细胞的自我复制和分化潜能来修复受损的细胞，恢复受损器官、组织的正常功能。

如何提取造血干细胞?

造血干细胞移植有两种方法，一是医生在供者的髂骨部位穿刺采集骨髓中的造血干细胞，术后一两天内有些疼痛，一周内就可完全恢复。此方法比较常见，但是捐献者会感到大腿有些疼痛的。

从捐献者的手臂静脉处采集全血，通过血细胞分离机提取干细胞同时将其他血液成分输回捐献者体内。被采集者只要手臂静脉处扎针即可，其余由机器自动处理。

提取造血干细胞 是用科学方法将骨髓血中的造血干细胞大量动员到外周血中，从捐献者手臂静脉处采集全血，通过血细胞分离机提取造血干细胞，同时，将其它血液成份回输捐献者体内。

干细胞是怎么制取的?

干细胞可以分为胚胎干细胞（从囊胚内细胞团分离-经体外培养形成稳定胚胎干细胞系）；成体干细胞（分离自成体不同的组织-例如，神经组织中分离的神经干细胞-骨髓或脐血中分离的造血干细胞或间充质干细胞等等方法各自不同）。

干细胞(stem cells， SC)是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES细胞)和成体干细胞(somatic stem cell)。

解决方法：从体细胞一般是受精卵通过有丝分 裂繁殖而来的，已分化的细胞都有一套和受精卵相同的染色体，携带具有本物种特征的DNA分子的角度，得出细胞全能性。 课时安排：1课时 教学方法：讲解法。教具准备：课件 学生活动 通过具体实例，启发学生得到细胞全能性的概念。

充质干细胞成脂诱导分化培养基的配制 诱导液？你说的是成骨诱导条件培养基吧。5天后半量换液，第10天当观察到少量细胞变为梭形、贴壁，即全量换液，改为条件培养基。此后每3-4天换1次条件培养基。倒置显微镜隔日观察，直至细胞不能传代、衰老死亡为止。下面就是爬片的制作，染色以及结果判定了。

制取方式不同 自体脂肪：自体脂肪从人体自身某些部位吸取多余的皮下脂肪细胞，然后经过吸出的混合物经净化处理、注入药物得到复合脂肪颗粒。SVF：是从患者自体抽取的脂肪组织中提取有效成分。优点不同 自体脂肪：不会产生免疫反应和排异反应。

你也说了“动物细胞培养一般只增殖不分化”，这个“一般”就是有特例的。胚胎干细胞就是一个特例，它会受到环境中信号物质的影响而分化，所以我们培养时候一定要加入抑制其分化的物质。

大鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养

细胞传代到第 3 代时，生长融合后，细胞形态均一，呈长梭形集落样分布，并可重叠生长，细胞纯度可达 95%以上。此时细胞可用于后续实验，或采用表表面标志物进一步验证其纯度：验证标准为CD34 阴性，CD44 阳性。从本实验结果中可见：全骨髓培养法可分离培养出纯度高、活力旺盛的骨髓间充质干细胞。

动物选择：优先选择4-6周龄大鼠，因其细胞活性高，易于增殖。培养基：选择α-MEM培养基，加入10% FBS和0.01%双抗以抑制污染。操作技巧：选择一次性塑料细胞培养瓶，保持无菌操作。换液策略：频繁换液去除杂细胞，但需防止细胞损失，初次换液后补加培养液观察8小时。

严谨的全骨髓提取首先，通过颈椎脱臼法进行全骨髓提取，对股骨和胫骨进行消毒，然后冲洗并分离骨髓。随后，通过离心和稀释，得到富含细胞的悬液，这是后续分离的第一步。 培养与观察细胞被计数后，置于恒温培养箱中，10% CO2环境中培养，密切关注细胞状态，适时更换培养基以维持最佳生长环境。

骨髓干细胞主要分为造血干细胞和间充质干细胞两大类。Sato等研究者发现，当将人的骨髓细胞分为MSCs、CD34细胞和非MSCs/CD34细胞后，移植到大鼠肝脏，结果显示MSCs是肝细胞的主要来源，并未发现细胞融合的情况。

林育辉等人在《广东医学》2011年报道了hBcl一2和hVEGF165双基因重组腺病毒载体对大鼠骨髓间充质干细胞转染的研究，见548-551页(5)。袁源等人在《中华行为医学与脑科学杂志》2011年研究了人脐带干细胞携带NGF基因对脑损伤大鼠神经行为的影响，该部分详细阐述了298-301页(6)。

其基本方法是取4-8周龄BALB/c小鼠的脾脏，制成单细胞悬液，用无血清培养液洗涤2-3次，然后悬浮于含10%小牛血清的培养液中，再加入适量抗原(可溶性抗原0.5-5ug/ml，细胞抗原105-106个细胞/ml)和一定量的BALB/c小鼠胸腺细胞培养上清液；在37℃，6%CO2浓度下培养3-5天，再分离脾细胞与骨髓瘤细胞融合。