干细胞病毒转染MOI值,干细胞移植后病毒高

『病毒包装』慢病毒包装原理和步骤

1、慢病毒包装简要流程：1）含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3）培养48hrs-72hrs左右，收集含有病毒的上清培养液。4）病毒的纯化和浓缩。5）分装、-80℃保存。6）滴度测定目的基因鉴定。

2、病毒包装的原理，就是有遗传物质有外壳蛋白，在细胞内可以指导二者包成病毒。腺病毒扩增，也只能在293A里扩增，其他的细胞不行.慢病毒载体多是由HIV改造的，野生型的慢病毒载体是可以复制的，但是用于实验室就只能通过改造使其变为复制缺陷型的。

3、转染与病毒收集：在转染后48至72小时内收集病毒，分次进行，最后通过超速离心、过滤和纯化，得到浓缩的慢病毒。 滴度检测：将病毒稀释后接种到293T细胞，通过荧光观察计算病毒滴度，公式为：滴度（TU/mL）=细胞数×荧光百分比×10/病毒原液体积。

4、慢病毒包装是一个精细的过程，主要包括以下步骤：首先，在第1天，需要准备转移质粒、膜蛋白表达质粒和两个包装质粒（Gag/Pol和Rev），并将它们共同转染到包装细胞中。 第3天，转移质粒在细胞内转录出携带目的基因的HIV RNA，与组装蛋白和调控蛋白结合，形成病毒颗粒并分泌到细胞外。

5、慢病毒包装实验主要包括以下几个步骤：构建慢病毒载体、选择细胞、准备材料与设备、实施转染、收集病毒、浓缩与纯化以及测定病毒滴度。实验材料包括慢病毒载体、细胞（如293T细胞）、大肠杆菌菌株DH5α或stbl3，以及用于扩增载体和辅助包装质粒的试剂设备。

慢病毒转染荧光不是100%

1、Q9：过表达病毒为何荧光较暗？不同类型的病毒有包装容量限制，插入基因会影响荧光蛋白等基因的表达。对照病毒或干扰病毒没有插入基因或插入基因短，荧光表达通常较强。插入较长基因片段后，荧光亮度会减弱，尤其是出现高GC片段，影响转录时，荧光强度降低。

2、小时后可见明显荧光表达。查询丁香论坛，如果慢病毒含有荧光蛋白，一般转染48小时后可见明显荧光表达，72小时后更加明显。荧光是一种光致发光现象。

3、慢病毒细胞转染是指利用慢病毒作为载体，将某种外源基因和重组质粒等DNA分子导入到目标细胞中的一种技术手段。慢病毒可以带有细胞进入人体细胞内，随后融入宿主细胞的DNA中。此种技术应用广泛，可以用于基因治疗、基因表达等研究中。

4、影响慢病毒滴度的因素有：包装细胞 293T细胞作为最常用的包装宿主，其健康状态是影响病毒产量的最关键 因素。用于慢病毒包装的293T细胞的传代数不宜过高，使用30代以内的 293T细胞慢病毒产量都维持在一个较高的水平。转染 高效率的转染也是保证高滴度的关键。

利用携带目的基因的腺病毒载体感染细胞有何优势

1、腺病毒载体的优点 宿主范围广， 对人致病性低 腺病毒载体系统可广泛用于人类及非人类蛋白的表达。腺病毒可感染一系列哺乳动物细胞，因此在大多哺乳动物细胞和组织中均可用来表达重组蛋白。特别需要指出的是：腺病毒具有嗜上皮细胞性，而人类的大多数的肿瘤就是上皮细胞来源的。

2、首先，腺病毒载体的宿主范围广，可广泛用于人类及非人类蛋白的表达。其感染一系列哺乳动物细胞的能力，使得在大多哺乳动物细胞和组织中均可用来表达重组蛋白，尤其对肿瘤细胞有亲和力，且其复制基因和致病基因已清楚，人群中已有广泛的流行，人类感染后仅产生轻微的自限性症状，且病毒唑治疗有效。

3、DT载体是一种广泛应用于基因工程领域的载体，其全称为“重组腺病毒载体”，其主要作用是将需要表达的基因导入目标细胞，从而实现基因治疗等目的。DT载体具有高转化效率、稳定性强等优势，因此在临床上被广泛应用。

4、看你用来细胞导入外源基因（目的基因）的载体是什么。如果用的是病毒类载体，比如腺病毒类载体，逆转录病毒类载体等等，则一般目的基因会与该细胞的染色体结合。如果用的是质粒载体，比如用的最多的YAC，那么一般是不会与染色体结合的。