用外泌体处理细胞为什么不加血清
1、来源不同：细胞上清外泌体是由细胞主动分泌产生的一种小型细胞外囊泡，主要存在于细胞表面或分泌到胞外环境，是细胞与周围环境信息交流的一种重要方式。而血清是指血液中不含血细胞的部分，由肝脏和肾脏等器官分泌产生，通过血液循环系统传输到全身各器官。
2、一般培养24-48h后细胞即可分离外泌体，在特殊情况下，如在培养基中添加特殊的化学物质，培养15-60min即可收集。因细胞死亡会分泌小体，所以在研究外泌体时细胞的死亡率一定要控制 5% 之内。未经处理的FBS中含有大量的外源外泌体，所以细胞培养一定要用经过处理不含外泌体的FBS。
3、在样本处理和外泌体提取过程中，会遇到一些常见问题，如血浆电镜图片背景杂乱、CD63条带呈弥散状、样品粘度过大、血清来源的外泌体污染、细胞凋亡过程中的杂质污染等。对于这些问题，需要采取相应的处理方法，如血清超速离心去除外泌体、选择无血清培养基进行细胞培养等。外泌体提取后，需要合理保存。
4、聚合物沉淀法通过超亲水聚合物沉淀析出外泌体，但可能受到其他蛋白质污染。免疫亲和层析法通过特异性结合外泌体表面蛋白进行分离纯化，保证高特异性和外泌体生物活性。以磁珠捕获法为例，提取外泌体的操作步骤包括样品前处理、外泌体分离纯化与实验注意事项。实验结果受到多种因素影响，需要严格控制实验条件。
5、研究发现，不同来源的EVs在纯化过程中表现出差异，这主要是由于采用的分离方法不同。因此，需要对这些方法进行比较分析，以制定统一的EVs分离纯化和表征标准。以下内容对比了不同纯化方法在血浆、细胞上清和尿液样本中的表现。
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