干细胞细胞刮刀,干细胞涂抹

jetanin

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ChIP超详细实验步骤

留取300μl 做实验，其余保存于-80℃。300 μl中，100 μl 加抗体做为实验组；100 μl 不加抗体做为对照组；100 μl 加入4 μl 5 M NaCl（NaCl终浓度为0.2 M），65℃处理3 h解交联，跑电泳，检测超声破碎的效果。

实验步骤染色质制备：取材、交联、固定、破碎、洗涤、重悬、浓缩DNA片段。免疫沉淀：预杂交、抗体孵育、磁珠吸附、洗涤、解交联、DNA纯化。纯化后分析：定量PCR或ChIP-seq等方法进行后续分析。值得注意的是，交联过程需谨慎控制，染色质切割需优化条件，抗体选择至关重要，操作过程中应保持低温和避免气泡产生。

ChIP的一般流程：甲醛处理细胞---收集细胞，超声破碎---加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白-DNA复合物相互结合---加入ProteinA，结合抗体-靶蛋白-DNA复合物，并沉淀---对沉淀下来的复合物进行清洗，除去一些非特异性结合---洗脱，得到富集的靶蛋白-DNA复合物---解交联，纯化富集的DNA-片断---PCR分析。

进行RIP实验时，基本流程如下：首先，从细胞中获取裂解液，为后续步骤提供基础样本。然后，制备含有抗体的磁珠，用于后续的免疫沉淀步骤。进行关键步骤：RNA结合蛋白的免疫沉淀，即利用抗体将目标蛋白与其结合的RNA结合物吸附在磁珠上。沉淀后，通过纯化步骤分离出RNA，以便后续的分析。

杰特宁

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