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细胞免疫荧光

细胞免疫荧光技术在细胞生物学研究中扮演着重要角色，它被广泛应用于蛋白定位研究、免疫检测以及抑菌作用测试等领域。这项技术的核心原理是将抗原与特定的荧光标记抗体结合，从而在显微镜下观察到特异性抗原的存在与否。

在进行细胞免疫荧光染色时，通常会同时使用DAPI染料来标记细胞核，以便于在后续的图像分析中区分细胞核和荧光标记蛋白的位置。使用电脑软件将DAPI染色的细胞核与荧光标记蛋白的图像进行合并（merge），可以更清晰地观察到荧光蛋白的定位情况。

. 配制荧光标记的二抗：Ab50598 Goat anti-rabbit IgG(H&L) TRITC，使用PBS或FBS稀释至1：200。1 加入二抗，室温下避光孵育1小时。1 用冰1‰Tween洗两次，每次5分钟，然后在摇床上用冰PBS洗一次，5分钟。1 加入DAPI进行细胞核染色，每皿滴加1滴，确保覆盖所有细胞。

材料【样品】使用贴壁细胞作为实验样本。【试剂】4%组织固定液、PBS、Triton X-100、BSA、荧光二抗、免疫荧光染色二抗稀释液、抗荧光猝灭封片液，以及0.25%胰酶。【器材】包含6/12/24孔板、细胞爬片（盖玻片）、载玻片以及15ml离心管。

细胞实验免疫荧光染色实验具体步骤如下：首先，以冰冻切片为例，进行组织样本制作。将组织置于多聚甲醛中固定过夜，然后进行30%蔗糖脱水，使用包埋剂在-20℃冷冻台上进行冰冻处理。将冷冻好的组织块修平，根据不同的组织类型调整预切厚度，通常脑组织的贴片厚度为15-25um。

在进行细胞免疫荧光染色时，对于使用FITC标记的二抗，需特别注意避免荧光分解的问题。在分装和使用荧光显微镜观察时，务必保证环境避光，以保护荧光的稳定性。封片材料的选择也十分重要。建议使用甘油加0.5mmol/L pH0-5的碳酸氢盐缓冲液作为封片剂。