小鼠间充质干细胞荧光标记原理
当经荧光染色或标记的单细胞悬液放入样品管中，被高压压入流动室内。流动室内充满鞘液，在鞘液的包裹和推动下，细胞被排成单列，以一定速度从流动室喷口喷出。
CFSE（AbMole Cat#M5117）是一种荧光染料，具有较强细胞膜通透性，进入细胞后乙酸基团可被细胞内酯酶水解，丧失膜通透性，保持高荧光活性。此时的 CFSE 形成可激发荧光的蛋白复合物，不会脱离细胞，且不会影响邻近细胞。
DiD：是一种红色荧光染料，因其高荧光信号、不易淬灭和自身荧光干扰低的特性，广泛应用于细胞/组织染色以及小动物活体成像。DiD标记的细胞或分子可以在活体成像中清晰显示，有助于研究细胞迁移、分化、增殖等生物学过程。
研究者通过实验鉴定了体外培养的焦亡间充质干细胞（MSCs）和脓毒性小鼠血液中的pyroEVs，并发现它们能显著保护脾脏和骨髓中的B细胞，降低炎症反应，提高脓毒症小鼠的存活率。实验结果1揭示了焦亡间充质干细胞通过焦亡过程产生特异性ev，这些ev携带与焦亡相关的分子，如凋亡相关斑点样蛋白（ASC）。
标记细胞接种到实验动物体内后，外源给予底物荧光素，即可在几分钟内产生发光现象。荧光素酶发光是生物发光，不需要激发光，但需要底物荧光素。荧光素具有280道尔顿的小分子，水溶性和脂溶性好，可以快速穿透细胞膜和血脑屏障。观察时间没有最短限制，只要条件控制一致。
DiD 是一种红色荧光染料，因其高荧光信号、不易淬灭和自身荧光干扰低的特性，广泛应用于细胞/组织染色以及小动物活体成像。Yao Huang 等人研究中，使用 DiD 标记的骨髓间充质干细胞外泌体，成功促进了骨肉瘤的发展，揭示了外泌体在癌症发展中的潜在作用。
杰特宁
干细胞示踪技术主要包括哪些标记方法
1、目前标记干细胞标记的干细胞的方法的MRI 对比剂主要有两类标记的干细胞的方法： 一类是以Gd3+对比剂即所谓顺磁性对比剂标记的干细胞的方法，主要产生T1 正性对比效应，目前有关标记的干细胞的方法的应用报道不多，主要是因为在目前MRI 场强下Gd3+的量需要达到相当程度，这在技术上尚有难度。当然也有几项研究成功地应用Gd3+复合物通过胞饮作用或细胞内吞作用进入细胞内而后行MRI 的报道。
2、为标记的干细胞的方法了克服这种情况，研究人员进行了系列实验，首先他们将健康大鼠中的心脏干细胞与放射性示踪剂18FDG一起温育——示踪剂18FDG带有放射性氟，用于标记这些移植干细胞。然后将这项健康大鼠中的心脏干细胞移植入，那些手术使之心脏受损的大鼠心脏中。
3、目前， 分子影像学用于干细胞活体示踪的技术主要包括光学成像、磁共振成像、超声成像、核医学成像， 后者主要包括单光子发射计算机断层显像和正电子发射计算机断层显像，我们率先采用多模式报告基因成像系统，对心肌内移植的胚胎干细胞的存活、增殖和迁移进行了研究(Cao F， etal. Circulation 2006)。
CFSE用于大鼠骨髓间充质干细胞体外染色标记实验
骨髓间充质干细胞(BMSCs)在治疗领域因其独特的属性，如取材方便、体外大量扩增和自体移植避免免疫排斥及伦理问题，成为组织工程种子细胞和基因治疗的理想选择。文献指出，MSCs 移植可用于治疗正己烷中毒导致的周围神经病，然而，应用于组织工程和基因治疗前，高效、安全的 BMSCs 标记是首要解决的问题。
方法： (1)通过体外分离培养与提纯小鼠骨髓间充质干细胞，骨髓中性粒细胞。 (2)通过体外共培养体系，Annexin-V-PI标记，流式细胞仪检测中性粒细胞凋亡情况。
